高速离心机分离植物细胞膜的方法
发布日期：2016-10-21
这种方法我们成功提取过拟南芥，玉米胚芽鞘，烟草悬浮细胞的质膜。
1，组织破碎，你可以用研本。如果存在大量粗纤维的话，你还可以用纱布过滤一下。
裂解液配方，0.55M 蔗糖；0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗坏血酸。用Hcl 调整HP 到7.8。
原料/裂解液 1：2
2， 研磨液 分3次低速离心分离出那些不需要的组织残渣或细胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。（速度不够的话适当延长时间，否则悬浮液中会存在大量的线粒体之类的细胞器）。
3， 上一步得到的悬浮液是含有总膜的悬浮液，一般情况下， 下一步应该利用高速离心20000G以上的离心力，把所有的膜沉淀出来进一步纯化（这里你最好找个高速离心机，推荐选用H2050台式高速大容量离心机，离心力如果不够分离不出来，如果原料非常多的话可能会析出一些，你也可以试着改变下裂解液的蔗糖浓度，理论上密度变了以后沉降系数也会改变，不过这个要做大量的计算工作以确保不影响膜的纯度）。纯化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度两种方法， 蔗糖梯度比较老了，效果不是很好，但是蔗糖很便宜很好弄。我们用的是6.3%PEG/Dextran 。
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