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低速离心机制备细胞膜的分离实验

发布时间： 2016-10-13

试剂：生理盐水，0.25mol/L 蔗糖溶液（含0.3mol/LCacl2），0.34mol/L 蔗糖溶液（含0.3mol/LCacl2）；器件：常规的分离细胞膜的。
1）取空腹12h雄鼠（150g),断头处死，放血。解剖取肝脏，迅速用生理盐水洗净，用滤纸吸干。取3g肝脏剪碎，经冷的0.25mol/L 蔗糖溶液洗涤数次，加18ml预冷0.25mol/L 蔗糖溶液匀浆，用双层尼龙膜过滤，备用。
2）将匀浆的放入离心管中，沿壁小心加入等体积的0.34mol/L 蔗糖溶液覆盖于样品上，以700g离心10min.
3）将离心沉淀以0.25mol/L 蔗糖溶液洗涤， 1000g（3500r/min）离心10min，重复一次。
4）离心后沉淀为细胞核，其上有一较疏松的上层，小心吸出此上层，悬于密度d20为1.16的蔗糖溶液（51g/L)中，移入离心管，沿壁加密度d20为1.18的蔗糖溶液（51.5g），覆盖在样品层上层。700g（3000r/min）离心10min，细胞膜组分位于两层溶液界面，小心吸出，置低温保存，以备进一步分析。

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